Website: https://vjfc.nifc.gov.vn/
Website: https://vjfc.nifc.gov.vn/
Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus (SpltNPV) là virus côn trùng thuộc họ Baculoviridae, có tính đặc hiệu cao đối với sâu khoang (Spodoptera litura) và được sử dụng trong các chế phẩm thuốc bảo vệ thực vật sinh học. Nghiên cứu này nhằm xây dựng và thẩm định phương pháp phát hiện và định lượng SpltNPV bằng kỹ thuật real-time PCR. Phương pháp được phát triển dựa trên khuếch đại gen lef-8, gen mã hóa yếu tố biểu hiện muộn có tính bảo tồn và đặc hiệu cao ở SpltNPV. Đoạn gen mục tiêu sau khuếch đại được xác nhận bằng giải trình tự Sanger để khẳng định chủng chuẩn, cho thấy độ tương đồng ≥ 99% với trình tự lef-8 của SpltNPV đã công bố. Phương pháp real-time PCR cho thấy độ chính xác, độ đặc hiệu và độ nhạy đều đạt 100%, với giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng đạt 10² OB/g, không ghi nhận khuếch đại ở mẫu đối chứng âm. Đường chuẩn Ct–log₁₀ nồng độ DNA virus thể hiện mối tương quan tuyến tính tốt (R² = 0,995). Các chỉ tiêu độ lặp lại và độ tái lập đều đáp ứng yêu cầu chấp nhận theo CEN/TS 17329-1:2021 và ISO 22118:2011. Kết quả cho thấy phương pháp được đề xuất có độ tin cậy và tính ổn định cao, phù hợp cho phát hiện, định lượng và kiểm soát chất lượng SpltNPV trong các chế phẩm thuốc bảo vệ thực vật sinh học.
Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus; realtime PCR; SpltNPV
[1] K. Maes, “Spodoptera litura (taro caterpillar)” CABI Compendium, CAB International, Wallingford, UK, 2014.
[2] D.S. Hill, “Agricultural insect pests of the tropics and their control - Second edition,” Cambridge University Press, Cambridge, 1987.
[3] M. Ahmad, M. I. Arif, and M. Ahmad, “Occurrence of insecticide resistance in field populations of Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae) in Pakistan,” Crop Protection, vol. 26, pp. 809-817, 2007.
[4] World Health Organization, “Public health impact of pesticides used in agriculture,” WHO Press, Geneva, 1990.
[5] G. W. Blissard and G. F. Rohrmann, “Baculovirus diversity and molecular biology,” Annual Review of Entomology, vol. 35, pp. 127-155, 1990.
[6] G. F. Rohrmann, Baculovirus Molecular Biology, 4th ed. Bethesda, MD, USA: National Center for Biotechnology Information, 2019.
[7] M. Gani, R. K. Gupta, and K. Bali, “Efficacy of Spodoptera litura multiple nucleopolyhedrovirus after serial passage through the homologous insect larval host,” Indian Journal of Experimental Biology, vol. 52, pp. 369-374, 2014.
[8] Rohrmann GF. Baculovirus Molecular Biology [Internet]. 4th edition. Bethesda (MD): National Center for Biotechnology Information (US); 2019. Chapter 2, Structural proteins of baculovirus occlusion bodies and virions. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/books/NBK543455/. Rogers-Broadway
[9] C. S. Molina-Ruiz, J. A. Zamora-Briseño, O. Simón, R. Lasa, and T. Williams, “A qPCR assay for the quantification of selected genotypic variants of Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus (Baculoviridae),” Viruses, vol. 16, no. 6, 2024.
[10] M. P. Zwart, M. M. van Oers, J. S. Cory, J. W. M. van Lent, W. van der Werf, and J. M. Vlak, “Development of a quantitative real-time PCR for determination of genotype frequencies for studies in baculovirus population biology,” Journal of Virological Methods, vol. 148, no. 1-2, pp. 146-154. 2008.
[11] T. H. H. Le et al., "Occlusion bodies purity of nuclear polyhedrosis virus (NPV) and product," Journal of Science of the Open University of Ho Chi Minh City - Engineering and Technology, vol. 14, no. 1, pp. 16-26, 2019 (in Vietnamese).
[12] I. Nazli-Huda, A. Sajap, and W. Lau, “Stability of Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus in sodium dodecyl sulphate,” Afr. J. Biotechnol., vol. 11, no. 16, pp. 3877-3881, 2012.
[13] Kouassi, L.N., Tsuda, K., Goto, C., Mukawa, S., Sakamaki, Y., Kusigemati, K., Nakamura, M., “Prevalence of latent virus in Spodoptera litura (Fabricius) (Lepidoptera: Noctuidae) and its activation by a heterologous virus,” Applied Entomology and Zoology 2009, 44, 95-102.
[14] J. Jose, S. K. Jalali, T. M. Shivalingaswamy, N. K. Krishna Kumar, R. Bhatnagar, and A. Bandyopadhyay, “Molecular characterization of nucleopolyhedrovirus of three Lepidopteran pests using late expression factor-8 gene,” Indian Journal of Virology, vol. 24, no. 1, pp. 59-65, 2013.
[15] J. A. Jehle, G. W. Blissard, B. C. Bonning, J. S. Cory, E. A. Herniou, G. F. Rohrmann, D. A. Theilmann, S. M. Thiem, and J. M. Vlak, “On the classification and nomenclature of baculoviruses: A proposal for revision,” Archives of Virology, vol. 151, no. 7, pp. 1257-1266, 2006.
[16] R. B. Hitchman, E. A. Siaterli, C. P. Nixon, and L. A. King, “Quantitative real-time PCR for rapid and accurate titration of recombinant baculovirus particles,” Biotechnology and Bioengineering, vol. 96, no. 4, pp. 810-819, 2007.
[17] K. R. Rogers-Broadway and E. Karteris, “Amplification efficiency and thermal stability of qPCR instrumentation: Current landscape and future perspectives,” Experimental and Therapeutic Medicine, vol. 10, no. 4, pp. 1261, 2015.