Website: https://vjfc.nifc.gov.vn/
Website: https://vjfc.nifc.gov.vn/
Nopaline synthase terminator (T-nos) là trình tự kết thúc phiên mã có nguồn gốc từ plasmid Ti (gây khối u) của Agrobacterium tumefaciens, được biết đến là một loại vi khuẩn đất có khả năng gây khối u trên thực vật. Trong lĩnh vực công nghệ sinh học thực vật, T-nos được sử dụng rộng rãi như một thành phần chức năng trong các cassette biểu hiện gen nhằm điều khiển hoạt động của các transgene trong cây trồng biến đổi gen. Việc sử dụng T-nos đảm bảo rằng quá trình phiên mã được kết thúc đúng vị trí, giúp tạo ra các phân tử mRNA ổn định và có khả năng dịch mã hiệu quả, từ đó tăng cường biểu hiện của gen mục tiêu. Nhờ tính tương thích cao với hệ thống biểu hiện trong thực vật và khả năng hoạt động ổn định trong nhiều loài cây khác nhau, T-nos đã trở thành một trình tự kết thúc chuẩn mực trong thiết kế vector chuyển gen thực vật. Phương pháp được sử dụng thường xuyên nhất để phát hiện sự hiện diện của vật liệu biến đổi gen trong các thực phẩm là sàng lọc trình tự Deoxyribonucleic acid (DNA) khởi động CaMV 35S và trình tự DNA kết thúc nos dựa trên kỹ thuậtPCR. Nghiên cứu này nhằm xây dựng phương pháp phát hiện gen T-nos (84 bp) trong nền sữa bằng kỹ thuật real time PCR kết hợp với đầu dò T-nos. Các vật liệu tham chiếu được chứng nhận có chứa đậu nành Roundup Ready GTS 40-3-2 và NK603 đã được sử dụng để phát triển và tối ưu hóa phương pháp. Phương pháp được đánh giá có độ nhạy cao với giới hạn phát hiện là 0,05%, độ đặc hiệu và độ chính xác đều đạt 100%.
realtime PCR, Nopaline synthase terminator, T-nos, GM.
[1]. L. Thị, T. Hải, H. Nga, N. P. Thúy, and L. T. Linh, “Genetically modified crops in the context of modern agriculture-benefits and risks,” Journal of Vietnam Agricultural Science and Technology, vol. 6, no. 115, 2020 [in Vietnamese].
[2]. Colin A. Carter, Guillaume P. Gruere, “International Approaches to the Labeling of Genetically Modified Foods,” The magazine of food, farm and resource, issues, second quarter, 2003.
[3]. Arne Holst-Jensen, Sissel B. Rønning, Astrid Løvseth, Knut G. Berdal, “PCR technology for screening and quantification of genetically modified organisms (GMOs),” Analytical and bioanalytical chemistry, vol. 375, no. 8, pp 985-993, 2003.
[4]. D. Zhou et al., “Detection of Bar Transgenic Sugarcane with a Rapid and Visual Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay,” Frontiers in Plant Science, vol. 8, no.7, p. 279, 2016.
[5]. G. Cottenet, C. Blancpain, V. Sonnard, and P. F. Chuah, “Development and validation of a multiplex real-time PCR method to simultaneously detect 47 targets for the identification of genetically modified organisms,” Analytical and Bioanalytical Chemistry, vol. 405, no. 21, pp. 6831–6844, 2013.
[6]. S. Meriç, Ö. Çakır, N. Turgut-Kara, and Ş. Arı, “Detection of genetically modified maize and soybean in feed samples,” Genetics and Molecular Research, vol. 13, no. 1, pp. 1160–1168, 2014.
[7]. M. B. Gašparič et al., “Comparison of nine different real-time PCR chemistries for qualitative and quantitative applications in GMO detection,” Analytical and Bioanalytical Chemistry , vol. 396, no. 6, pp. 2023-2029, 2010.
[8]. Reiting et al., “Qualitative PCR method for detection of nopaline synthase terminator,” GMOMETHODS European Union Reference Laboratory for Genetically Modified Food and Feed (EURL GMFF), 2007.
[9]. R. Reiting, H. Broll, H. U. Waiblinger, and L. Grohmann, “Collaborative study of a T-nos real-time PCR method for screening of genetically modified organisms in food products,” Journal fur Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit, vol. 2, no. 2, pp. 116–121, 2007.
[10]. Tran Cao Son, Le Thi Hong Hao et al., Method validation and evaluation of measurement uncertainty in chemical analysis, Science and Technology Publishing, 2021 [In Vietnamese].
[11]. C. A. Commission, “Guidelines on performance criteria and validation of methods for detection, identification and quantification of specific dna sequences and specific proteins in foods,” pp.74,2010.
[12]. R. Reiting, H. Broll, H. U. Waiblinger, and L. Grohmann, “Collaborative study of a T-nos real-time PCR method for screening of genetically modified organisms in food products,” Journal fur Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit, vol. 2, no. 2, pp. 116–121, 2007.
[13]. S. Leimanis et al., “Validation of the performance of a GMO multiplex screening assay based on microarray detection,” European Food Research and Technology, vol. 227, no. 6, pp. 1621–1632, 2008.